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  • 技術文章
    葉綠素含量的測定的原理和方法
    發布時間:2018-10-11   點擊次數:117次
    一、實驗目的
    1.了解植物組織中葉綠素的分布及性質。
    2.掌握測定葉綠素含量的原理和方法。
    二、實驗原理
    葉綠素廣泛存在于果蔬等綠色植物組織中,并在植物細胞中與蛋白質結合成葉綠體。當植物細胞死亡后,葉綠素即游離出來,游離葉綠素很不穩定,對光、熱較敏感;在酸性條件下葉綠素生成綠褐色的脫鎂葉綠素,在稀堿液中可水解成鮮綠色的葉綠酸鹽以及葉綠醇和甲醇。高等植物中葉綠素有兩種:葉綠素a 和b,兩者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。
    葉綠素的含量測定方法有多種,其中主要有:1.原子吸收光譜法:通過測定鎂元素的含量,進而間接計算葉綠素的含量。2.分光光度法:利用分光光度計測定葉綠素提取液在最大吸收波長下的吸光值,即可用朗伯—比爾定律計算出提取液中各色素的含量。
    葉綠素a和葉綠素b 在645nm 和663nm 處有最大吸收,且兩吸收曲線相交于652nm 處。因此測定 提取液在645nm、663nm、652nm 波長下的吸光值,并根據經驗公式可分別計算出葉綠素a、葉綠素b 和總葉綠素的含量。
    三、儀器、原料和試劑 儀器 分光光度計、電子頂載天平(感量0.01g)、研缽、棕色容量瓶、小漏斗、定量濾紙、吸水紙、擦境紙、滴管。 原料 新鮮(或烘干)的植物葉片 試劑 1. 96%乙醇(或80%丙酮) 2. 石英砂 3. 碳酸鈣粉。
    四、操作步驟
    取新鮮植物葉片(或其它綠色組織)或干材料,擦凈組織表面污物,去除中脈剪碎。稱取剪碎的新鮮樣品2g,放入研缽中,加少量石英砂和碳酸鈣粉及3mL95%乙醇,研成均漿,再加乙醇10mL,繼續研磨至組織變白。靜置3~5min。 取濾紙1張置于漏斗中,用乙醇濕潤,沿玻棒把提取液倒入漏斗,濾液流至100mL 棕色容量瓶中;用少量乙醇沖洗研缽、研棒及殘渣數次,最后連同殘渣一起倒入漏斗中。 用滴管吸取乙醇,將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中。直至濾紙和殘渣中無綠色為止。最后用乙醇定容至100mL,搖勻。 取葉綠體色素提取液在波長665nm、645nm 和652nm 下測定吸光度,以95%乙醇為空白對照。
    五、計算

    按照實驗原理中提供的經驗公式,分別計算植物材料中葉綠素a、b 和總葉綠素的含量。

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